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化学发光成像系统在WB实验中的应用

作者:365bet足球网站发布时间:2019-02-17 01:20

化学发光成像系统在WB实验中的应用
在典型的WB测试方法中,存在膜阻断,一抗孵育,二抗孵育和底物颜色发展的四个“处理”步骤。
基材颜色的最终发展是最重要的部分,并且是最重要的项目之一。
WB显色主要包括四种方法:放射自显影,ECL底物化学发光,底物ECF荧光和底物DAB。已发表的论文一般使用ECL底物化学发光,它相对容易操作,只能购买可以使用化学发光检测试剂盒。
该试剂盒中常用的反应底物A和B分别是鲁米诺(也称为发光氨)和过氧化氢。原理如下(二抗用HRP标记):在HRP的催化下,鲁米诺和过氧化氢反应形成过氧化物,过氧化物分解并分解成光形成电子发射中间体。当后者从激发态返回到基态时,它发出荧光。可提供X光胶片和成像设备。
它采用传统的X射线胶片方法进行WB测试,最终需要使用暗室曝光进行ECL检测,但在暗室配置中浪费空间,在黑暗曝光中复杂的步骤化学厕所X射线胶片与有毒物质接触。
化学发光图像形成装置可以直接获取ECL发射图像,获得实验结果,并避免在暗室中曝光的缺点。
是否可以捕获ECL图像的事实主要取决于该装置是否具有冷却的CCD并且仅冷却的CCD可以灵敏地捕获由膜发射的光。
与冷却的CCD技术的发展,成像系统的成本已经变得越来越低,这些设备已经成为在当前实验室越来越流行。
实验室目前使用具有高灵敏度,快速图像速度和清晰图像结果的化学发光成像系统。
仪器非常易于使用:
1)如果在使用前开始预冷,则可在温度降至-20°C后对设备进行测试。
2)在化学发光检测试剂盒1:1中混合A和B.
3)将PVDF薄膜面朝上放入暗盒中,用移液枪将照明液均匀地涂在薄膜上,然后关闭黑盒门将其暴露。
4)曝光可以自动或手动完成。通常,单击自动曝光以观察图像效果。如果不理想,您可以手动调整曝光时间。
此外,该设备具有多种拍摄模式,因此您可以拍摄6张不同曝光时间的电影,使曝光更加方便。
内标总体示出为15秒(各图像带条的厚度是经调整的内标一致)开发,并且,对于每个步骤内标实验程序是正确的,和随后的蛋白质检测。我能做到靶蛋白的质量取决于其表达水平以及抗体的特异性和效力。
相比膜X,化学发光成像系统具有立即的图像处理,即时输出,需要和该膜处理装置的暗室成本,其优点例如可用软件的半定量分析。结果,在当前实验室中使用化学发光成像系统已逐渐取代暗室平板电脑的传统曝光测试。

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